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y el desarrollo de la comunicación. Permiten actuar sobre la información y
generar mayor conocimiento e inteligencia. Abarcan todos los ámbitos de la experiencia humana. Están en todas partes y modifican los ámbitos de la
experiencia cotidiana: el trabajo, las formas de estudiar, las modalidades para
comprar y vender, los trámites, el aprendizaje y el acceso a la salud, entre
otros.
En este Blog Encontraras Técnicas de Aglutinación y Precipitación las cuales se presentan y describen a continuación:
Aglutinación
Es la interacción entre un anticuerpo y una partícula
antigénica que se visualiza por la formación de agregados o grumos
macroscópicos. En este proceso, el anticuerpo es conocido como aglutinina y el
antígeno como el aglutinógeno. Las reacciones de aglutinación utilizan el mismo
principio de las reacciones de precipitación. Cuando el anticuerpo está en
exceso inhibe la reacción de precipitación, lo mismo ocurre en las reacciones
de aglutinación. Esta inhibición es llamada el efectop rozona.
Esta técnica es ampliamente usada para la
identificación rápida de bacterias, hongos, grupos sanguíneos y otros antígenos; también
es utilizada para la detección de anticuerpos que pueden ser indicativos de un
estado de enfermedad. La temperatura, el pH, la concentración de electrolitos,
son importantes para la realización de la prueba. La reacción final se
evidencia por la formación de malla o grumos visibles macroscópicamente.
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La unión antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es una interacción
reversible en la que están involucrados enlaces no-covalentes. En la
interacción in Vitro de un Ag con su correspondiente Ac se distinguen 2 etapas:
la interacción primaria no visualizable y la interacción secundaria, que sigue
a la anterior y se caracteriza por la aparición de un fenómeno visible como la
aglutinación o la precipitación. Por otro lado, no siempre que se produce la
interacción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya que, para conseguir
fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y características
de los Ags y Acs.
Técnicas
de aglutinación
Se basan en los cambios de propiedades que sufren el
antígeno y el anticuerpo al formar un complejo. Para poder darse necesitan
cumplirse una serie de características:
· *El anticuerpo debe poder unir por los dos brazos
al antígeno.
· *El antígeno deber tener más de un determinante
antigénico igual.
· *Los antígenos son elementos pequeños, son
partículas: bacterias, partículas de látex, hematíes, complemento...
Aglutinación directa
Se utilizan antígenos ya presentes en la cubierta de las
células. Es el caso de la determinación de grupos sanguíneos.
Se saca un poco de sangre, y se le añade a tres alícuotas de
esta, Ac A, Ac B, Ac RH un control positivo y uno negativo. Según la
aglutinación en cada pocillo, tendremos el grupo sanguíneo del individuo a
tipar.
Aglutinación
indirecta
Las partículas no llevan el antígeno pero se lo podemos
pegar químicamente. Se utilizan hematíes y partículas de látex. Puede usarse el
tamino como pegamento, entre otros. Incubación: Hematíes o látex + antígeno
Complejo partícula-antígeno.
En el caso de los hematíes tienen pegados fármacos o drogas
de forma inespecífica en la membrana, por ello al tomar un fármaco hay personas
que tienen anemia. Se utiliza para la detección de anticuerpo contra Treponema
pallidum o algunos factores reumatoides.
En caso de poseer aquello que estamos buscando, se
producirán grumos. A pesar de ser una técnica diseñada para su uso cualitativo,
puede hacerse semicuantitativa mediante el uso de diluciones. Esta técnica es
capaz de detectar 0,001
g/ml. Se denomina título a aquella dilución del suero que
todavía no ha perdido su acción.
Aglutinación con anti-inmunoglobulina
La mejor Ig para realizar este tipo de técnicas es la Ig M,
puesto que es la que mayor aglutinación produce, además de tener un mayor
número de brazos. Los hematíes tienen mucha carga negativa, y se repelen si
están muy cerca, haciendo imposible que un anticuerpo tenga un hematíe distinto
en cada brazo.
Utilizando una inmunoglobulina frente a la propia
inmunoglobulina G, obtenemos una ampliación que permite la aglutinación en el
espacio.
Un ejemplo de utilización de esta técnica es la que se
realiza cuando se practica el test de Coombs:
·
*Los anticuerpos frente a la Ig G pasan la
placenta.
· * En la sangre del niño hay más anticuerpos de la
madre Añadimos Ac frente a la Ig G y se ve la aglutinación Test directo.
· *Esto ocurre cuando la madre es RH negativa y el
niño RH positivo.
· *Se coge sangre de la madre más hematíes RH
positivos, le añadimos Ac frente a Ig G humana y vemos si hay aglutinación Test
indirecto.
· *La Ig G es mala aglutinante.
Precipitación
Combinación específica de anticuerpos precipitantes con los
correspondientes antígenos solubles. Al principio se forman complejos Ag-Ac soluble
y luego se produce la agregación de estos complejos en inmunoprecipitados. En
un medio soluble aparece así un enturbiamiento que puede registrarse cuantitativamente
y representa una medida de la cantidad de inmunoprecipitado.
Técnicas
de Precipitación
Difusión pasiva
(Medio líquido)
Se pondrá anticuerpo y antígeno y se dejarán que difundan
sin forzarlos. Si lo hacemos en medio líquido se conoce como técnica de
difusión doble.
No es una buena técnica para cuantificar, debido a su falta
de precisión. Existen otras dos técnicas de difusión pasiva, pero en lugar de
utilizar medio líquido, utilizan geles semisólidos, También requieren un tiempo
de incubación.
Difusión pasiva
(Medio semisólido) Ouchterlony
El nombre se debe al creador de la técnica. Se realiza sobre
un portaobjetos. Sobre este se coloca una película de agar, y se hacen dos
pocillos. En cada uno de esos pocillos se coloca antígeno y anticuerpo (Uno en
cada pocillo). Lo dejamos difundir 16 horas normalmente. Si aparece entre ellos
la línea de precipitación, habremos identificado aquello que buscábamos, ya sea
antígeno o anticuerpo. No es muy sensible.
Además de la falta de sensibilidad, posee otro gran
problema, que es la gran cantidad de muestra necesaria (En torno a
microgramos), lo cual hace su uso limitado a ciertos ensayos y utilidades.
Su utilidad es la de comparar la línea de precipitado entre
distintos antígenos. Podemos poner más de un pocillo en dos pocillos y comparar
ambos. Si la línea de precipitación es continua, los dos antígenos son iguales.
Si son distintos tendremos dos redes de precipitado que se cruzan. Puede
detectar cross reactividad o que alguno de los antígenos no se reconozca por el
antígeno.
Como es un método cualitativo, podemos hacer diluciones
seriadas y ver donde se pierde la banda, para poder cuantificar, pero es muy
poco precisa, denominándose semicuantitativa. Es la técnica conocida como
Ouchterlony de difusión pasiva doble.
Difusión pasiva (Medio Semisólido) Inmunodifusión radial
Se realiza en gel. El gel está embebido en uno de los
reactivos, y hacemos un pocillo con diluciones en el otro (Ag-Ac). Dejamos
difundir mucho tiempo. El Ag irá difundiendo, y al llegar a la zona de
equivalencia ([Ac]"[Ag]) se formará precipitado. La distancia del punto
central a la línea de precipitado es proporcional a la cantidad de Ag de la
muestra. Al compararlo con un patrón tendremos una cantidad.
Realizamos una recta patrón con las áreas de las muestras
conocidas y extrapolamos a la muestra problema.
Todas estas técnicas de precipitación podemos agilizarlas en
el tiempo, pudiendo en ciertas condiciones, como pH y corriente eléctrica,
forzando el movimiento para que se vean antes. Son técnicas de difusión que ya
no son pasivas, y suelen utilizarse por electroforesis.
Combinadas con electroforesis
En gel: Electroforesis en contracorriente. Es como el
Ouchterlony pero aplicando una corriente eléctrica. La línea aparece en pocas
horas. A pesar de ser cualitativa podemos hacerla semicuantitativa, pero se
hace en pocas ocasiones. Se usa poco, pero sobre todo para diagnosticar
enfermedades autoinmunes.
Técnica de Laurell o
del cohete
El gel se embebe con uno de los reactivos, y hacemos
diluciones seriadas. Lo sometemos a electroforesis. El arco del precipitado es
como un cohete en lugar de redondo. Es cuantitativa, comparando con una recta
patrón utilizando la longitud de los cohetes. A mayor longitud mayor
concentración de antígeno.
Inmunoelectroforesis
Posee una utilidad concreta: diagnóstico de tumores de
células plasmáticas: Mielomas. Aparece en personas ancianas. Tendremos muchos
anticuerpos de un solo tipo. En una electroforesis migrarán todas en el mismo
punto, en lo lugar de lo normal. También identifica el tipo de mieloma.
Se hace en medio semisólido (Agar normalmente), y haremos un
pocillo con el suero del enfermo, y un suero control, sometiéndolo a un campo
eléctrico. Cortamos el agar en esa zona entre los sueros y se aplica anticuerpo
contra Ig humana (Ig M por ejemplo). Al encontrar la equivalencia se formará
línea de precipitados.
Para la realización de un diagnóstico se deben poner todos
los anticuerpos frente a las inmunoglobulinas humanas.
Inmunofijación
Es el más utilizado en los últimos años. Sirve también en
diagnóstico de mielomas, pero es más rápido y sencillo. Se realiza en geles de
agar. Aplicamos el suero en distintos pocillos y se somete a una
electroforesis. Se colocan plantillas para separar los carriles y añadimos a
cada canal una anticuerpo distinto, Anti
Ig totales, Anti Ig M, Anti Ig A, Anti y
Anti. No se pone para D y E, porque son rarísimos dada su baja concentración en
sangre. Rápidamente se encuentra con el antígeno y precipita. Lo normal es un
patrón poco homogéneo de anticuerpo. Si existen mielomas habrá mucha cantidad
de ese anticuerpo y encontraremos una línea concreta. Se dan casos de
existencia de más de un mieloma.
Turbidimetria
Antes de precipitar, el medio se pone turbio, y midiendo
esta turbidez, podemos cuantificar. Se necesita muestra control. Para la
realización de esta técnica es necesario el uso de un espectrofotómetro.
Nefelometría
Es actualmente muy utilizada. Es un método directo para
medir la dispersión de la luz de forma cinética. Se hace normalmente con láser,
que incide sobre una solución. Se mide la desviación de la luz a lo largo del
tiempo. Es muy rápido y cuantifica. Puede utilizarse para medir el complemento,
pero no es demasiado sensible.
Vídeos
Comentario
Los alumnos de la mesa 8 tratamos de investigar a fondo el
tema asignado, las técnicas de aglutinación y precipitación son muy
importantes, ya que en ellas podemos identificar hongos, bacterias, etc. Que pueden dañar al organismo. Estas técnicas son utilizadas en todos los laboratorios,
estas nos ayudan mucho y sin ellas no podrían dar un resultado de la enfermedad
ya que no sabrían que es lo que está atacando a la persona, incluso estaríamos muy
retrasados en la información de todas las enfermedades y detención de ellas.
Esperamos que toda la información reunida sea de su ayuda y
agrado, esperamos que todo lo planteado este a la medida de lo que buscan.
Sin más decir damos las Gracias por visitar nuestro Blog.
Fuentes
